分光光度法测定土壤中的氨氮含量！

氨氮是指以游离氨和铵离子形式存在的氮。氨氮是土壤中一种重要的污染因子，对土壤中氨氮进行监测能够掌握其污染状况。本文参考《HJ634-2012 土壤 氨氮的测定 氯化钾溶液提取-分光光度法》，应用分光光度法测定土壤中氨氮含量。

实验准备

1.1方法原理

氯化钾溶液提取土壤中的氨氮，在碱性条件下，提取液中的氨离子在有次氯酸跟离子存在时与苯酚反应生成蓝色靛酚染料，在630nm波长具有ZUI大吸收。在一定浓度范围内，氨氮浓度与吸光度值符合朗伯-比尔定律。

1.2仪器设备

UV752N型紫外可见分光光度计

1.3 试剂

除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为电导率小于0.2ms/m（25℃时测定）的去离子水

浓硫酸ρ（H2SO4）=1.84g/ml

二水柠檬酸钠、二氯异氰尿酸钠、氯化钾、氯化铵、苯酚

1.4试剂配制

1.4.1 氯化钾溶液（1mol/L）：称取74.55g氯化钾，用适量水溶解，移入1000ml容量瓶中，用水定容、混匀。

1.4.2 氯化铵标准贮备液（200mg/L）：称取0.764g氯化铵（105℃下烘干2h），用适量水溶解，加入0.30ml浓硫酸，冷却后移入1000ml容量瓶中，用水定容，混匀。该溶液在避光、4℃下可保存一个月。

1.4.3 氯化铵标准使用液（10mg/L）：量取5.0ml氯化铵标准贮备液于100ml容量瓶中，用水定容、混匀。用时现配。

1.4.4 苯酚溶液：称取70g苯酚溶于1000ml水中。该溶液贮存于棕色玻璃瓶中，在室温条件下可保存一年。

1.4.5 二水硝普酸钠溶液：称取0.8g二水硝普酸钠溶于1000ml水中。该溶液贮存于棕色玻璃瓶中，在室温条件下可保存三个月。

1.4.6 缓冲溶液：称取280g二水柠檬酸钠及22.0g氢氧化钠，溶于500ml水中，移入1000ml容量瓶中，用水定容、混匀。

1.4.7 硝普酸钠-苯酚显色剂：量取15ml二水硝普酸钠溶液及15ml苯酚溶液和750ml水，混匀。该溶液用时现配。

1.4.8 二氯异氰尿酸钠显色剂：称取5.0g二氯异氰尿酸钠溶于1000ml缓冲溶液中，4℃下可保存一个月。

实验过程

2.1 标样测定

分别量取0、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、3.50ml氯化铵标准使用液于一组100ml具塞比色管中，加水至10.0ml，制备标准系列。氨氮含量分别为0、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、35.0ug。

向标准系列中加入40ml硝普酸钠-苯酚显色剂，充分混合，静置15min。然后分别加入1.00ml二氯异氰尿酸钠显色剂，充分混合，在15℃-35℃条件下只是静置5h。于630nm波长处，以水为参比，测量吸光度。以扣除零浓度的校正吸光度为纵坐标，氨氮含量（ug）为横坐标，绘制校准曲线。

2.2 样品测定

SCZ-82B型恒温水浴振荡器

将采集后的土壤样品去除杂物，手工或仪器混匀，过样品筛。在进行手工混合时应戴橡胶手套。过筛后样品分为两份，一份用于测定干物质含量，另一份用于测定待测组分含量。

称取40.0g试样，放入500ml聚丙烯瓶中，加入200ml氯化钾溶液，在20±2℃的恒温水浴振荡器中震荡提取1h。转移约60ml提取液于100ml聚乙烯离心管中，在3000r/min的条件下离心分离10min。然后将约50ml上清液转移至100ml比色管中，制得试料，待测。

量取10.0ml试料至100ml具塞比色管中，按照标准曲线比色步骤测定吸光度。同时做空白试验。

实验结果

3.1 标准曲线方程

根据标样测定方法测量各标样的吸光度，绘制标准曲线方程如下：

                 C=144.9A-0.4638  r=0.997

3.2 样品测定结果

根据《HJ634-2012 土壤 氨氮的测定 氯化钾溶液提取-分光光度法》和《HJ613-2011 土壤 干物质和水分的测定 重量法》进行计算，该土壤氨氮含量为15.9mg/Kg。

3.3 回收率测定

在样品中分别加入0.1ppm和0.2ppm的标准溶液，进行加标回收率实验测定结果如下：

3.4 精密度测定

对样品重复测试11次，得到相对标准偏差RSD为0.377%。

结论

本文参考《HJ634-2012 土壤 氨氮的测定 氯化钾溶液提取-分光光度法》对土壤中的氨氮含量进行测试，实验结果表明，使用UV-6000T型紫外可见分光光度计测试土壤中氨氮，该方法线性相关良好，r=0.997，RSD为0.377%，回收率95.35%-100.7%，测得土壤中氨氮含量为15.9mg/Kg。